Mario en Luigi, de loodgietertweeling, gaan in het Paddenstoelenrijk, waar ze nu wonen, met volle moed alledaagse problemen te lijf.

Ze helpen prinses Peach, proberen de geslonken schurk Bowser tijdens zijn gevangenschap op het rechte pad te krijgen, en ontmoeten een nieuw vriendje: Yoshi.

Het verjaardagsfeest van prinses Peach luidt een nieuw avontuur in, waarin de broers diep de ruimte in moeten reizen om Bowser Jr.'s snode plannen te stoppen en Rosalina te redden.

De introductie van geliefde personages als Rosalina en Bowser Jr. voegt extra actie, humor en een aantal schokkende onthullingen toe aan dit avontuur tussen de sterren!